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        制藥企業潔凈室怎樣進行環境微生物的監控

        作者: 點擊:1986 發布時間:2020-05-09


        制藥企業潔凈室常需進行環境微生物的監控,以確保出產環境的潔凈以及不會形成藥品的污染。制藥企業潔凈室常見的污染源如下(據我國食品藥品檢定研究院在2018年全國藥品微生物查驗控制技能精要操練班上的講座ppt):


        1、人體攜帶的微生物主要有:金葡、表葡、八疊球菌、不動桿菌、產堿桿菌、親脂性酵母、皮膚真菌等。


        2、空氣帶有的微生物主要有:微球菌屬、芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、棒狀桿菌、曲霉、青霉。


        3、設備、墻面、地上表面。存留的微生物首要有:假單胞菌、表葡、芽孢桿菌等。


        4、原材料及包裝材料。帶著的微生物有:乳桿菌、假單胞菌、芽孢桿菌、鏈球菌、梭菌、霉菌(枝孢屬、青霉屬、曲霉屬)。


        5、水中的微生物主要有:假單胞菌、產堿桿菌、寡養單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌、皮氏伯克霍爾德菌、甲基桿菌屬、沙雷氏菌、黃桿菌等。


        許多企業為了斷定菌種,常將許多資金用于微生物全自動斷定儀器和相關試劑的購買。其實,一些微生物生化斷定試劑盒(無須軟件和儀器)、差異培養基和PCR試劑盒即可結束常見菌種的斷定工作。


        關于以上赤色標出的菌種或菌屬,已知均可用HiMedia出產的生化斷定試劑盒去作斷定。其生化斷定試劑盒包含有生化斷定卡及輔佐試劑,每個生化斷定卡上有12個孔,預置相關的培養基和生化試劑,對應12種生化反應。反應結束后,通過試劑盒內供應的效果詮釋表和菌種標準表,即可人工結束菌種斷定。其試劑盒掩蓋大部分常見菌種,準確度高,在歐盟和美國FDA均有產品注冊。


         上面的常見菌群中,金葡、表葡可用葡萄球菌的生化斷定試劑盒(貨號KB004)進行斷定,不動桿菌、芽孢桿菌、乳桿菌、鏈球菌均有相應的生化斷定試劑盒。假單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌可用非發酵菌生化斷定試劑盒(貨號KB019)進行斷定。沙雷氏菌歸于腸桿菌科,可用腸桿菌科的生化斷定試劑盒(貨號KB003)進行斷定。


         關于黃色部分的菌種:寡養單胞菌,又稱嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),舊名“嗜麥芽假單胞菌”。它和皮氏伯克霍爾德菌、黃桿菌均可用非發酵菌試劑盒進行斷定。


        關于藍色部分的菌種:


        1、微球菌屬。常見為藤黃微球菌(Micrococcus luteus)。其為革蘭氏陽性,與葡萄球菌近似,菌落光滑,顏色呈黃或赤色。為條件致病菌,廣泛存在于自然界?!恫苁霞毦鷶喽ㄊ謨浴分赋?,其接觸酶陽性,無運動性,可利用乙酸鹽、乳酸鹽和丙酸鹽,不發生吲哚。根據生化特征差異藤黃微球菌時,首要根據其在含糖的雜亂培養基上好氧的生長而不發生可察覺的酸。其菌落呈黃色、黃綠色或橙色。詳細斷定,可選用如下方案:1)先革蘭氏染色,觀察鏡下形狀,如為球形,革蘭陽性,且疑為葡萄球菌或微球菌。2)可選用“葡萄球菌和微球菌發酵培養基”(英文名Fermentation HiVeg Medium for Staphylococcus and Micrococcus,貨號#MV827),以差異微球菌和葡萄球菌。其原理是,培養基中包含葡萄糖,葡萄球菌能厭氧產酸,而微球菌不能。培養基含有的溴甲酚紫為pH指示劑,可指示產酸帶來的pH改動。該液體培養基含有少數瓊脂,因而創造出厭氧環境。培養18-24小時后,如果是藤黃微球菌,則反應管沒有顏色改動,而葡萄球菌的管變為金黃色。


        2、八疊球菌屬:歸于消化球菌科,細胞球形,呈八個或更多細胞的立方堆狀??蓸嫵裳挎?,革蘭陽性??砂l酵葡萄糖,產酸,專性厭氧,在pH1到9.8均可生長。無接觸酶。鏡下應不難辨認。


        關于產堿桿菌,它與產堿假單胞菌非常近似,它的差異特征是在含有蛋白胨的肉湯培養基中產氨,使pH上升。糞產堿桿菌常見,它在碳水化合物培養基上呈劇烈的產堿反應。木糖氧化產堿桿菌使OF葡萄糖培養基和OF木糖培養基產酸。本菌能恢復亞硝酸鹽,而不能恢復硝酸鹽。因而,選用OF根底培養基(英文名:OF Basal HiVegTM Medium,貨號MV395)和相應的糖溶液可差異產堿桿菌。


        關于棒狀桿菌,它歸于革蘭氏陽性大桿菌,接觸酶陽性??蛇x用碲酸鹽血瓊脂平板進行別離培養,棒狀桿菌菌落呈灰黑色。


        關于甲基桿菌,可選用PCR 法擴增菌株的16S rDNA 和甲醇脫氫酶大亞基的 mxaF 基因,擴增產品進行測序,在NCBI數據庫頂用BLAST 進行比對,并用MEGA4.0軟件進行系統進化樹分析。甲基桿菌為革蘭陰性,氧化酶和接觸酶陽性。


         關于梭菌,大部分為嚴峻厭氧菌。在《伯杰細菌斷定手冊》中給出了一個表,首要根據糖發酵來斷定梭菌屬內的各個菌種。HiMedia公司供應了一種包含35種糖發酵的試劑盒(貨號KB009),因而可用于梭菌的斷定。


        關于真菌,如親脂性酵母和霉菌(枝孢屬、青霉屬、曲霉屬),首先從形狀上可差異細菌,也可差異酵母和霉菌,霉菌常常有絲狀菌絲。不同霉菌,有些從形狀上也可差異。青霉菌屬帚狀枝是根據青霉菌屬特征性效果,根據菌落特征、分生孢子梗、帚狀枝、瓶梗和分生孢子形狀特征,就可斷定到屬甚至種水平。曲霉具有有隔菌絲、分生孢子梗和特別的分生孢子頭結構,易與其他菌屬真菌差異。還可根據SDA或PDA平板上生長的快慢、菌落形狀、分生孢子梗等進一步差異。HiMedia也供應了一款差異培養基,貨號M1127,可差異巴西曲霉、黃曲霉和寄生曲霉。


        總之,關于制藥企業潔凈室的常見菌,通過形狀染色、生化斷定(可選用市面上供應的生化斷定試劑盒)、PCR產品測序等辦法,已足以滿意斷定的需求,然后結束溯源和確診的使命。


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